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Extração de Proteínas da Microalga Spirulina e Análise da Atividade Antimicrobiana da Fração Proteica
Larissa Thais Pereira, Carolina Krebs de Souza, Leonardo Machado da Rosa, Lisiane Fernandes de Carvalho

Última alteração: 2018-02-06

Resumo


A Spirulina é uma microalga rica em proteínas, vitaminas e minerais, apresentando propriedades nutricionais e farmacêuticas.  Devido a sua qualidade nutricional é aplicada na alimentação humana e animal, além de apresentar efeitos terapêuticos, como redução de colesterol e câncer. Em vista do exposto, este trabalho teve por objetivo avaliar a extração das proteínas da microalga Spirulina sp. LEB 18, bem como avaliar a atividade antimicrobiana da fração proteica da biomassa microalgal frente aos microrganismos patógenos Escherichia coli, Sataphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa.  Inicialmente foi determinado o teor de proteínas da biomassa microalgal, utilizando o método de determinação de nitrogênio total Kjeldahl, com fator de conversão de 6,25. Para a extração da fração proteica da biomassa e avaliação da atividade antimicrobiana sete amostras foram submetidas a diferentes tratamentos. Com isso, quatro amostras de biomassa foram suspensas em água destilada (1:25 m/v) e submetidas a banho ultrassônico (40 kHz) por 60 min, após as amostras seguiram para diferentes procedimentos. Três amostras foram submetidas a extração com sulfato de amônio a 20%, 40% e 60% (m/v) de saturação, a 4 °C com 1 h de agitação e 15 h de repouso.  Após este processo, as amostras foram centrifugadas a 6000 rpm e 4 °C por 40 min. O sobrenadante foi coletado e o precipitado resuspendido em água destilada. Os sobrenadantes das precipitações com 20%, 40% e 60% foram denominados 1,2 e 3, respectivamente, e as amostras resuspendidas da precipitação com 20%, 40% e 60% de sulfato de amônio foram denominadas 4, 5 e 6, respectivamente. A amostra que não sofreu precipitação foi denominada 7. Todas as amostras foram ajustadas para pH 10 com hidróxido de sódio (2M). Por fim, foi realizada centrifugação a 6000 rpm e 25 °C por 30 min. O sobrenadante das amostras foi analisado quanto ao teor de proteínas e atividade antimicrobiana. A análise da atividade antimicrobiana foi realizada utilizando a técnica de difusão em poço, para isto placas com ágar Mueller-Hinton foram preparadas, inoculadas com o microrganismo e adicionadas da amostra em análise de atividade.  As placas foram incubadas em estufa a 35±1 ºC por 24 h. Por fim o halo de inibição do crescimento microbiano foi mensurado. A biomassa apresentou em sua composição 41,97% (m/m) de proteínas e os sobrenadantes das sete amostras apresentaram um teor proteico entre 1,33% e 44,92% (m/m). Nas condições estudadas nenhuma amostra apresentou atividade antimicrobiana frente aos microrganismos testados.  Através dos resultados obtidos é possível verificar que a metodologia aplicada para extração de proteínas da biomassa não foi eficiente nas condições estudadas, desta forma é necessário avaliar o aprimoramento da metodologia aplicada e outras metodologias como a precipitação de proteínas por mudança de pH.


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