A própolis é uma mistura das secreções salivares e cera das abelhas com material resinoso coletado de diversos tipos de plantas. Estudos tem demonstrado sua complexa composição química e diversas atividades biológicas. O potencial e a importância dos compostos voláteis como constituintes bioativos da própolis tem sido demonstrado, porém faz-se necessária a investigação de própolis de abelhas sem ferrão nativas do Brasil, ainda pouco estudadas. Desta forma, este trabalho teve como objetivo a obtenção do óleo volátil da própolis da abelha Melipona bicolor schencki através da hidrodestilação, caracterização dos constituintes químicos e avaliação da atividade antimicoplasmática contra Mycoplasma pneumoniae 129. As amostras de própolis, coletadas nos municípios de Blumenau (SC) e Pomerode (SC), foram moídas e submetidas à hidrodestilação por 4 horas. O óleo obtido foi submetido a GC-MS e caracterizado por comparação com a literatura. O teste antimicoplasmático foi realizado pelo método de microdiluição em caldo contra M. pneumoniae 129. Os compostos majoritários caracterizados na amostra P foram: δ-cadineno (15,42%) seguido de α-pineno (10,46%) e Limoneno (7,12%) e  na amostra B: α-pineno (38,9%) seguido de β-pineno (26,5%) e Limoneno (4,78%). A amostra P apresentou fraca atividade antimicoplasmática, contudo a amostra B teve resultados mais promissores na inibição do crescimento bacteriano. Nas amostras analisadas pode-se observar a variável constituição e teor de compostos voláteis presentes na própolis, que são diretamente ligados a especificidade da flora.. Faz-se necessário ampliar a investigação da atividade antibacteriana in vitro contra outras espécies de micoplasmas e bactérias com parede celular para uma avaliação mais ampla do potencial antibacteriano dos óleos voláteis da própolis de Melipona bicolor Schencki.